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茜素紅染色

簡要描述:茜素紅染色:成骨分化是干細(xì)胞的一個重要特性。在特定的誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用一段時間后,干細(xì)胞可分化為成骨細(xì)胞,在細(xì)胞表面沉積鈣鹽,形成鈣結(jié)節(jié)。應(yīng)用茜素紅的復(fù)合物,可用于鑒定干細(xì)胞是否已成功向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

  • 更新時間:2025-02-28
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問  量:23

詳細(xì)介紹

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一、染色步驟

  1. ?樣本固定?

    • 成骨誘導(dǎo)分化結(jié)束后,吸去培養(yǎng)基,用1×PBS輕柔洗滌細(xì)胞2~3次?23

    • 加入4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定液,室溫固定30分鐘?12。

  2. ?洗滌與風(fēng)干?

    • 去除固定液后,用蒸餾水或1×PBS沖洗3次以去除殘留固定劑?12。

    • 風(fēng)干載玻片或培養(yǎng)板,確保樣本干燥?34

  3. ?染色處理?

    • 加入0.1%茜素紅染色液(溶于0.05M Tris-HCL緩沖液,pH8.3),37℃孵育5-30分鐘(時間依鈣鹽含量調(diào)整)?12

    • 染色后迅速用蒸餾水沖洗,避免染料殘留導(dǎo)致背景過深?23

  4. ?復(fù)染與觀察?

    • 可選固綠染色液復(fù)染1分鐘以增強(qiáng)背景對比度?34。

    • 顯微鏡下觀察:鈣結(jié)節(jié)呈橙紅色,背景為綠色或粉紅色?23。

  5. ?保存?

    • 染色后樣本用封口膜密封,4℃保存可維持染色效果2周?23


二、關(guān)鍵注意事項

  1. ?操作輕柔?

    • 避免劇烈震蕩或長時間暴露于液體中,防止鈣結(jié)節(jié)脫落?12

  2. ?染色條件優(yōu)化?

    • 染色液使用前需恢復(fù)至室溫,染色時間根據(jù)鏡下鈣鹽沉積量動態(tài)調(diào)整(通常5-10分鐘)?23

    • 染色過深時可用1%鹽酸酒精分色?4。

  3. ?試劑選擇?

    • 推薦使用商品化茜素紅S試劑(如Beyotime ST1078-5g),純度穩(wěn)定?5。

    • 固定劑優(yōu)先選擇中性福爾馬林,避免酸性條件干擾鈣鹽結(jié)構(gòu)?24。


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