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E15天胎鼠脊髓神經(jīng)元的原代培養(yǎng)

更新時(shí)間:2021-11-12      點(diǎn)擊次數(shù):1065
  一、背景
  神經(jīng)元原代培養(yǎng)是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,如大腦皮層、海馬、脊髓等腦組織直接取出,再接種培養(yǎng)的方法。目前國(guó)內(nèi)、外有關(guān)神經(jīng)元培養(yǎng)的方法較多,但在原代培養(yǎng)中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問題。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,相對(duì)于其它細(xì)胞而言,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(zhǎng)。因此,體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營(yíng)養(yǎng)條件均較為特殊。
  神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)是研究神經(jīng)源性疾病的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)程的一個(gè)重要工具,能很好的、直觀的反映離體神經(jīng)元的發(fā)育狀況和生理活性,如何建立一個(gè)穩(wěn)定成熟的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)體系是神經(jīng)系統(tǒng)疾病體外實(shí)驗(yàn)研究順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究的逐漸深入,神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)在腦損傷、神經(jīng)障礙性疾病、衰老相關(guān)神經(jīng)疾病方面得到廣泛重視和普及應(yīng)用。
  二、實(shí)驗(yàn)步驟
  (1)75% (體積分?jǐn)?shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
  (2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細(xì)剝離脊膜及血管。
  (3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;
  (4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。
  (5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min;
  (6)收集上清,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
  (7)培養(yǎng)第二天,全換液更換為種植液2;
  (8)培養(yǎng)第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;
  (9)之后每周換液兩次。

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伊萊博生物科技(上海)有限公司是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域研究,集生物技術(shù)和產(chǎn)品開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)、以及科研能力培訓(xùn)服務(wù)為一體的綜合型高科技企業(yè)。目前已建成并投入使用的實(shí)驗(yàn)室面積近2800平方米,包含基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、組學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái),基本能夠滿足科研課題研究的全流程。

伊萊博生物擁有專業(yè)的技術(shù)支持和實(shí)驗(yàn)操作人員團(tuán)隊(duì),核心成員來自中科院、復(fù)旦、交大、同濟(jì)等國(guó)內(nèi)重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu),能夠提供前沿的、完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)咨詢與服務(wù)。

為了響應(yīng)國(guó)家大力發(fā)展基礎(chǔ)研究的號(hào)召,推動(dòng)實(shí)驗(yàn)科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步,伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢(shì),為廣大科研工作者提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)服務(wù),從理論和實(shí)操兩個(gè)部分,培養(yǎng)其科研思維以及解決問題的能力,為今后的科研工作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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